Complexe Couette Reversible Allison Vallee - Nous avons évalué la linéarité des immunosignaux des anticorps anti-ch1923-1932p et cnc1 à l'aide du chargement de 50, 100 et 200 du tissu d'une immunoprécipitation préférée sur un gel. Des films publicitaires ont été tournés pendant 0, 5, 1 et 2 minutes et les immunosignaux ont été quantifiés à l'aide de la densitométrie (28, 33). Doubler le temps d'exposition ou la quantité de charge de l'anti-ch1923-2932p et les preuves d'anti-cnc qui en découlent1. Plus efficace, les plus longues expositions des plus grandes quantités d’antigènes chargés jusqu’à saturation (parent 1b). Par conséquent, les indicateurs se situent largement dans la plage linéaire. Boom de la phosphorylation basale de α11.2 sur la sérine 1928 chez des rats âgés de 26 mois. ?eleven.2 est devenu immunoprécipité à partir d'extraits d'hippocampe de rats lobund-wistar âgés de 12 et 26 mois. Les immunoblots ont été sondés avec de l'anti-ch1923-1932p, décapés avec du sds et du dtt et reproduits avec de l'anti-cnc1 (26). Les immunosignaux anti-ch1923-1932p (haut) et anti-cnc1 (milieu) de forme longue et brève ont été quantifiés par densitométrie. Signaux pour anti-ch1923-1932p corrigés pour les variations de quantités relatives de α1c basés totalement sur les indicateurs cnc1 de la forme longue α1c (en bas). Les valeurs pour α11.2 de forme longue et brève ont été normalisées à l’aide de la définition des valeurs moyennes de cent pour αeleven.2 de forme longue et courte. Le stade de phosphorylation courant de la sérine 1928 est de 16,7 chez le rat (voir figure 3); par conséquent, nous fixons la moyenne de toutes les valeurs pour toutes les autres. Les barres représentent une moyenne de seize échantillons ± sem. La petite quantité globale la plus faible de la forme courte α11,2 chez le rat antique jusqu'à 89 ± 6 de l'adulte est statistiquement grande (p <0,05 au moyen d'une anova à une manière et de quelques comparaisons de dunnett). Le psd-quatre-vingt-quinze est une protéine structurelle préoccupée par le regroupement des récepteurs nmda (quarante-six, 47) et par l'accumulation de récepteurs de l'acide α-amino-trois-hydroxy-5-méthylisoxazole-4-propionique sur les sites web postsynaptiques (quarante huit, 49). Des groupes de récepteurs nmda peuvent se former à l'intérieur de la membrane plasmique dendritique somatique et, principalement, du psd-95 (quarante six, 50). En conséquence, il est supposé que la rencontre du récepteur nmda complètement mature, comprenant psd-quatre-vingt-quinze ou l'un de ses homologues, survient après que le récepteur nmda a atteint la membrane plasmique et, éventuellement, la synapse (cinquante et un). Une réduction de la plage des synapses devrait être observée par une plage inférieure en général de psd-quatre-vingt-quinze (en raison de l'arriéré et de la dégradation) ou le diplôme de son association avec les récepteurs nmda ou le psd-95 en retard n'est pas toujours dégradé avec succès . Les homologues du psd-95 peuvent être associés à leurs objectifs dans le réticulum endoplasmique (cinquante deux), et une telle association peut être cruciale pour la libération de complexes de récepteurs nmda de ce compartiment (53, 54). Un candidat qui pourrait remplir cette caractéristique est sap102 (cinquante-quatre). De plus, sap102 est associé aux récepteurs nmda et se localise avec les récepteurs nmda au niveau des sites postsynaptiques (35, 45, cinquante-cinq). Sap102 est assez considérable dans la fraction soluble dans le triton x-cent et coimmunoprécipite à partir d'extraits de triton x-cent avec nr1 (54), que l'on trouve dans cette fraction spécifiquement sous une forme non assemblée et non assemblée (44). Dans l'évaluation, le psd-quatre-vingt-quinze est difficile à trouver dans la fraction soluble dans le triton x-cent. Du fait que sap102 contraste avec la distribution préférée de psd-95, il peut échanger à un moment donné une perte synaptique et dendritique dans un échantillon exclusif de celui de psd-quatre-vingt-quinze. Nous avons extrait des échantillons d'hippocampe de rats âgés de 12 et 26 mois avec du désoxycholate, qui solubilise le triton x-cent piscines de récepteurs nmda psd-95 et sap102 solubles et insolubles. Des échantillons ont été utilisés simultanément pour l'immunoblot avec anti-psd-95 ou anti-sap102 ou après immunoprécipitation de complexes de récepteurs nmda. La quantification des immunosignaux a montré que la quantité totale de psd-95 et leur affiliation aux récepteurs nmda n'avaient pas changé chez les rats de 26 mois d'âge (déterminer 3b). Ensemble, ces résultats suggèrent que la quantité et le nombre de sociétés standard de neurones ne sont pas sensiblement modifiés au cours de la période de 26 mois, contrairement aux rats individuels.

Immunoprécipitation et immunoblot. Le tissu cérébral est amassé chez des rats lobund-wistar de 12 et 26 mois. Chaque rat a subi une nécropsie complète pour l'évaluation pathologique, qui comprend des autopsies du cœur et du rein pour exclure toute modification pathologique. Cinquante milligrammes de tissu hippocampique ont été homogénéisés dans 0,5 ml d'un tampon triton x-100 contenant des inhibiteurs de protéase et de phosphatase et ont été éliminés en utilisant l'ultracentrifugation à un autre endroit (26, 36). Pour la quantification de map2b et nr1 de triton x-cent solubles et insolubles, 20 µl de surnageants et de pastilles (remis en suspension dans 0,5 ml de tbs) ont été analysés par immunoblot (26, 37). Les anticorps α11.2 deviennent immunoprécipités à partir d’extraits de triton x-100 avec anti-cnc1 (10 μg dans 500 μl, voir réf. 20 et 21) avant immunoempreinte avec anti-ch1923-1932p et éventuellement avec anti-cnc1 (26, 36). Pour la quantification de psd-95 et de sap102, 50 mg de tissu hippocampique ont été homogénéisés dans zéro,5 ml d'un tampon de désoxycholate avant l'ultracentrifugation (32, 37). Les surnageants ont été utilisés soit directement pour l’immunoempreinte (20 µl), soit après immunoprécipitation (500 µl) avec une combinaison d’anticorps anti-nr2a et anti-nr2b (32,33,37). Tous ceux-ci ont été exposés pendant de plus en plus de temps (par exemple, 30, 60 et cent vingt secondes). Pour s'assurer que les indicateurs étaient compris dans la variété linéaire, les indicateurs les plus simples, doublés avec des temps d'exposition croissants, ont été utilisés pour la quantification. La pka augmente l'activité du canal de type l dans les neurones (13 à 16 ans) et à l'intérieur du cœur, où la stimulation du canal de type l cardiaque à base de pka est essentielle à la stimulation de la stimulation adrénergique du pouls (17, 18) . Deux canaux de type l différents ont été reconnus dans les neurones cav1.2 et cav1.3 (19-21). Cav1.2 est le canal de type l dominant dans les neurones (≈ightight; voir réf. 20). Cav1.2 inclut une sous-unité α1 impérative (unique α11.2), servant de paperasse au pore (19) réalisant les ions, et aux sous-unités auxiliaires α2-δ, -β et -γ (22). Le plus simple αeleven.2, et aucune des sous-unités auxiliaires, n’est requis pour la croissance de l’activité du canal induite par la pka (23). ?eleven.2 est phosphorylée dans des neurones d'hippocampe intacts par la pka (24). Le site web principal sur la phosphorylation sur αeleven.2 est la serine 1928 (25, 26), ce qui est essentiel pour la mise en place du passe-temps de la chaîne par pka (27). Cette page web est proche de l'extrémité c de α11.2, elle est présente uniquement dans la forme complète de α11.2 (21) et est éliminée à l'aide de la protéase calpaïne activée par ca2 après un afflux de ca2 par les récepteurs nmda (28 ). La calpaïne clive ineven.2 ~ 300 résidus en amont de l'extrémité c-terminale in vitro (28). La suppression des trois cent quatre cents résidus ultimes d'αeleven.2 augmente le passe-temps dans les canaux lorsqu'il est exprimé dans des ovocytes de xenopus (29); par conséquent, le clivage induit par la calpaïne peut immédiatement augmenter le jeu de loisirs cav1.2 in vivo. Comme la calpaïne a été impliquée dans l'étiologie de la maladie d'alzheimer (30, 31), nous avons commencé par rechercher si le rapport de la forme longue αeleven.2 à la forme brève αeleven.2 était modifié chez les rats antiques. La quantité de αeleven.2 de forme longue a été réduite à peine, et la forme brève a légèrement diminué dans l'au-delà, ce qui montre que le traitement par calpaïne n'est pas responsable de la croissance de l'intérêt des canaux en forme de l au cours du vieillissement . Cependant, nous avons déterminé que la phosphorylation de α11.2 avait considérablement augmenté chez les rats âgés. Nous avons étudié les modifications de la capacité de nombreux régulateurs à la mode de la phosphorylation médiée par la pka, qui ne présentaient plus de changement significatif. Les niveaux d'ampc avaient à peine augmenté chez les rats âgés, mais les changements n'étaient plus statistiquement énormes (pupitre 1). Pour assurer une phosphorylation efficace de cav1.2, l’un d’eux, map2b, doit être relié sans délai à la liaison de pka à cav1.2 (26, 56). Comme décrit ci-dessus, ni la quantité totale de map2b ni sa distribution parmi les cabines de triton x-cent solubles et insolubles ne sont modifiées chez les rats âgés. La pka comprend les sous-unités régulatrices r et catalytiques c. L'isoforme cα est associée à cav1.2 (26). La liaison de cα à cav1.2 est légèrement accrue chez les rats d’époque, mais la distinction est maintenant devenue statistiquement non énorme (pupitre 1).

Phosphorylation de cav1.2 via les mesures de pka et de camp. Pour la phosphorylation stoechiométrique in vitro (21), cav1.2 s'est transformé en immunoprécipité, incubé dans 50 µl de tampon de phosphorylation (0,1 triton x-cent / 50 mm hepes-naoh, ph 7,4 / 10 mm mgcl2 / zéro mm egta / atp 50 µm / inhibiteurs de la protéase dtt 0,5 mm) contenant zéro à 1,5 µg de sous-unité pka c purifiée, catalytiquement active, pendant 30 min à 32 ° c; les cav1.2 sont ensuite lavés et analysés par immunoblot avec anti-ch1923-1932p (26). Les taux d'ampc ont été déterminés dans des extraits d'acide trichloroacétique de tissus de l'hippocampe selon le protocole du fabricant (signal transduction products, san clemente, ca). La nimodipine, un antagoniste des canaux de type l, élimine les déficits d'apprentissage chez les rongeurs (huit, cinquante-sept à soixante-treize). L’afflux de ca2 par les canaux de ca2 de type l est fortement augmenté chez les rongeurs d’époque (9, 64). Les canaux de type l sont importants pour de nombreux types de plasticité synaptique consistant en une potentialisation à long terme (ltp) (65, 66) et une dépression à long terme (67, soixante-huit). De nombreux types de ltp et de mélancolie à long terme dépendent de l'afflux de ca2 sur les sites web postsynaptiques, qui est généralement véhiculé par l'utilisation de récepteurs nmda (soixante-neuf, 70). Cav1.2 est regroupé sur les sites web postsynaptiques (28, 71), où il contribue à l'afflux de ca2 (soixante-douze). La ltp précipitée par le tétanos à fréquence excessive (2 cent hz) à l'intérieur de la position ca1 de l'hippocampe est mieux inhibée en partie au moyen d'inhibiteurs des récepteurs nmda; la partie alternative est sensible aux antagonistes des canaux de type l (65). L'aspect ltp structuré par le récepteur nmda est réduit et l'élément ltp basé sur le canal de type l est accéléré chez des rats en croissance (soixante-treize). De plus, l'amélioration du passe-temps des canaux de type l au cours du vieillissement est au minimum responsable de la régulation positive de l'après-hyperpolarisation dans les neurones ca1 de l'hippocampe, ce qui pourrait faire exploser l'intérêt des canaux ok activés par le ca2, ce qui entraîne des modifications supplémentaires de la plasticité synaptique (74 -6 sept). Par conséquent, une dysrégulation structurée du canal l de la plasticité synaptique peut contribuer aux déficits liés à l’âge en matière d’acquisition de connaissances et de réminiscence. Mais, le fondement moléculaire de l'augmentation de 2 fois l'entrée de ca2 était en grande partie inconnu. Nous avons trouvé que la phosphorylation médiée par la pka du canal cav1.2 de type l est fortement régulée positivement chez les rats lobund-wistar âgés de 26 mois. Remarque: il est préférable de demander votre adresse e-mail. Il est donc recommandé de comprendre qui vous intéresse, et que ce n'est pas du courrier direct. Nous ne prenons maintenant aucune adresse e-mail.

Quantification de la phosphorylation d'αeleven.2 médiée par la pka. Pour déterminer le stade de phosphorylation basale de la sérine 1928 chez des rats adultes, α11.2 s'est immunoprécipité avec l'anti-cnc1, qui est devenu à la fois une longueur variable (21) (fig. 1). ?eleven.2 a ensuite été analysé par immunoblot avec anti-ch1923-1932p, un anticorps qui interagit spécialement avec la page web de la sérine 1928 sous sa forme phosphorylée, bien que non déphosphorylée (26) (parent 1 aupper). Dans quelques cas, l'αeleven.2 immunoprécipité est devenu phosphorylé sur la sérine 1928 avec la pka purifiée ci-dessous dans des situations qui se sont terminées par une phosphorylation stoechiométrique (c'est-à-dire proche de la totalité) de α11.2 (21) avant l'immunoempreinte (figure 1a, ligne 3). D'autres échantillons immunoprécipités en parallèle ont été laissés non traités (figure 1a, pistes 1 et quelques autres). Quelques extractions et immunoprécipitations ultérieures ont été réalisées en l'absence d'inhibiteurs de la phosphatase, ce qui conduit à la phosphorylation finale de la sérine 1928 (26, 36) et, en conséquence, à l'absence d'un immunosignal lors de la recherche d'anti-ch1923-1932p (figure 1a, voie 1). Ces observations permettent de vérifier que l'anti-ch1923-1932p handiest reconnaît la forme phosphorylée de α11.2. Le décapage et le republication d'immunoblots avec anti-cnc1 ont confirmé que des quantités similaires d'αeleven.2 avaient été trouvées dans tous les échantillons (fig. 1 ci-dessous). Nous n'avons pas pu définir le fondement moléculaire de la croissance de la phosphorylation de cav1.2. Les stades à la mode des inhibiteurs 1 et 2 de l'ampc, de pp2a et de pp1 n'avaient pas été modifiés. L'association de pka avec cav1.2 est devenue également inchangée. Nous émettons l'hypothèse que les ajustements peuvent être assez subtils, probablement en raison du fait qu'ils impliquent des modifications localisées des composants des voies de signalisation correspondantes. Nous avons récemment déterminé une colocalisation avec le récepteur β2 adrénergique sur des sites web postsynaptiques à l'intérieur de l'hippocampe et l'assemblage de tous les composants de cette voie de signalisation dans une signalisation macromoléculaire complexe, incluant le récepteur β2 adrénergique, la protéine trimérique gs et un cyclase adénylique ) de la même manière que la pka et la phosphatase contrecarreuse pp2a (26, 36). De plus, la signalisation du récepteur β2 adrénergique vers cav1.2 est assez confinée au niveau régional dans les neurones de l'hippocampe (71). Par conséquent, des modifications associées à l'âge dans la phosphorylation de cav1.2 peuvent être dues à des modifications dans l'affiliation de ces additifs de signalisation à cav1.2 ou à des modifications localisées dans la fabrication de l'ampc. La dédicace des fondements physiologiques et moléculaires de la phosphorylation de cav1.2 tout au long du vieillissement nécessiterait de rechercher un gâchis de telles opportunités. Les impulsions neuronales de ca2 dans le courant principal moléculaire de la neuropathologie et de l'inflammation neuronale. Etant donné que l’étiologie des signes et des symptômes séniles et de la maladie d’alzheimer peut susciter une inquiétude grandissante, ces études peuvent en outre préserver la capacité de proposer l’idée de développer des traitements pour les patients atteints de ces maladies et d’autres maladies connexes. . Map2b est préférentiellement localisé dans les dendrites (42). En raison de son interaction avec le cytosquelette, map2b n'est pas sincèrement extrait des lieux dendritiques à l'aide du triton x-cent (43). Une perte énorme de systèmes dendritiques entraînerait une réduction des gammes globales de map2b ou une redistribution d’un triton x-cent insoluble à un pool de triton x-100 soluble. L'immunotransfert après séparation des pools de map2b insolubles solubles par ultracentrifugation n'impliquait plus aucune redistribution ni commerce dans le pool de map2b chez les rats âgés de 26 mois (figure 3a).

Quantification de la phosphorylation de αeleven.2 sur la sérine 1928. ?eleven.2 a été immunoprécipité avec de l'anti-cnc1 provenant d'extraits d'hippocampe triton x-100 provenant de rats adultes pour immunoempreinte avec anti-ch1923-1932p (soixante-douze). Après stripping avec sds et dtt, les transferts ont été reprobés avec anti-cnc1 (71). (A) l'anticorps anti-ch1923-1932p a diagnostiqué l'α11.2 alors que les inhibiteurs de la phosphatase étaient inoffensifs (piste 2) mais ne l'ont pas été lorsqu'ils ont été négligés (piste 1). La phosphorylation in vitro de l'α11.2 immunoprécipitée avec de la pka purifiée a fortement amélioré le signe (piste 3). (B) cinquante pour cent (la moitié de 1 immunoprécipité), 100 et 2 cent (immunoprécipités mélangés) d'immunoprécipités ont été utilisés pour l'immunoempreinte. Les films ont été exposés pendant 0,5, 1 et une paire de min et les immunosignaux ont été quantifiés par densitométrie (28, 33). Les valeurs indiquées par les barres reproduisent la commune de trois échantillons. (C) après immunoprécipitation de αeleven.2, un échantillon est devenu non phosphorylé in vitro avec de la pka purifiée in vitro dans des conditions qui ont permis de terminer la phosphorylation du site web de pka sur αeleven.2, tel que quantifié à l'avance (21). Les immunosignaux anti-ch1923-1932p ont été corrigés pour tenir compte des différences de quantités relatives de la forme longue α11.2 entièrement basée sur les alertes anti-cnc1 correspondantes. Dans des conditions basales, seize,7 ± 1. Huit (sd; n = trois, acquises dans trois expériences uniques) de la forme allongée α11.2 est phosphorylée sur la sérine 1928 (barre de gauche), cent équivalant au signe anti-ch1923-1932p reçu après phosphorylation in vitro. évaluation des ajustements possibles des systèmes synaptiques ou dendritiques pour la durée du vieillissement. Il est possible, bien que controversé, que la quantité totale de protéine de canal cav1.2 soit constante, en raison de la perte d'un degré cellulaire, est compensée par une augmentation de la densité de canaux. Et, donc, intérêt à l'intérieur des neurones survivants. Nous avons déterminé les quantités relatives de plusieurs protéines marqueurs neuronales dans des fractions uniques organisées à partir d’extraits d’hippocampe. Le nombre de contacts synaptiques est réduit dans l'esprit vieillissant des mammifères (85-88). Un passe-temps amélioré pour les canaux de type l dans les fonctions neuronales en contribuant à la perte synaptique à un certain stade du vieillissement, la voie ascendante des canaux de type l doit apparaître plus tôt qu'une réduction complète de la quantité de synapses. Par conséquent, nous avons examiné les ajustements de la phosphorylation et, par conséquent, le passe-temps est arrivé avant la perte synaptique chez les rats lobund-wistar. Nous avons recherché des modifications de nombreuses protéines marqueurs dendritiques et postsynaptiques chez des rats antiques âgés de 26 mois à 12 ans. Ni la solubilité du triton x-cent ni la quantité totale de map2b ne se sont modifiées en altérées chez les rats vintage. Ces effets indiquent que la distribution globale de map2, enrichie sélectivement en dendrites (et donc vraisemblablement de la durée et du diplôme d'arborisation des dendrites), reste inchangée pendant toute la période de croissance précoce. De même, nous n'avons plus eu de modifications dans la solubilité dans le triton x-100 de la sous-unité nr1 du récepteur nmda. La protéine psd-quatre-vingt-quinze d'échafaudage interagit particulièrement avec les récepteurs nmda matures sur les sites web postsynaptiques (quarante-six, 47, 89). Par conséquent, on s'attend à ce que la perte synaptique soit mise en parallèle par le biais d'une diminution du psd général à quatre-vingt-quinze degrés ou du moins de son degré d'appartenance aux récepteurs nmda. Cependant, nous n'observons à présent aucun ajustement important de la quantité totale de psd-quatre-vingt-quinze ou de sa co-immunoprécipitation avec les récepteurs nmda. Ces résultats corroborent en outre l’hypothèse selon laquelle les paramètres synaptiques et dendritiques ne sont pas modifiés de façon spectaculaire au cours des premières années de croissance chez les rats. Le sap102, homologue du psd-95, se lie en outre aux récepteurs nmda et les localise sur des sites web postsynaptiques (35, 45, 55). En outre, sap102 peut également entrer en contact avec le récepteur nmda dans le réticulum endoplasmique et une telle interaction peut être vitale pour la libération du récepteur nmda de ce compartiment (cinquante-trois, cinquante-quatre). Contrairement au psd-95, une grande partie du sap102 est correctement solubilisée au moyen de triton x-100 et co-immunoprécipitée avec le nr1 immature extrait de triton x-100. Mais, à l'instar du psd-95, ni la quantité totale de sap102 ni son association avec les récepteurs nmda n'ont été modifiées à l'intérieur des rats âgés. En résumé, un grand nombre de protéines marqueurs neuronales dans leur distribution ou leurs interactions protéine-protéine, s'opposant aux grands changements synaptiques ou dendritiques dans notre version plus ancienne et en croissance. Pour cette raison, la croissance de la phosphorylation de cav1.2 médiée par la pka et, par conséquent, le passe-temps des canaux se produisent chez les rats lobund-wistar.

Map2b, nr1, psd-95 et sap102 sont inchangés chez les rats vintage. Les échantillons d'hippocampe ont été homogénéisés dans 1 triton x-cent (a) ou 1 désoxycholate (b) et les protéines solubles et insolubles ont été séparées par ultracentrifugation. (A) des aliquotes de quantités comparables de surnageants (proprement dit) et de pastilles (gauche) ont été analysées par immunoblot avec des anticorps anti-map2b et nr1 et quantifiées à l'aide de densitométrie. (B) des aliquotes des surnageants ont été immunotransférées directement avec les anticorps anti-psd-95 et anti-sap102 (à gauche) ou après leur co-précipitation avec les récepteurs nmda en utilisant un ensemble d'anticorps anti-nr2a et nr2b pour l'immunoprécipitation (proprement dit). Ceux-ci représentent la moyenne de n échantillons ± sem (n est donné dans chaque barre). Nous avons également étudié si l’augmentation de la phosphorylation pouvait être due à une réduction de la phosphorylation du canal, qui est induite en partie à l’aide de pp2a (36). Cependant, le stade protéique total de la sous-unité catalytique de pp2a était inchangé (tableau 1). Enfin, nous avons examiné si les stades protéiques des inhibiteurs 1 et d'une paire de phosphatase pp1 sensible à l'acide okadaïque avaient été modifiés en une quantité statistiquement importante, avec des effets terribles (pupitre 1). En résumé, ces statistiques indiquent que les degrés de signalisation de la pka varient dans de nombreux cas, dans le cas de la pka cα, de manière localisée chez les rats âgés de 26 mois. Par conséquent, les modifications sont responsables de la régulation à la hausse de la phosphorylation d'αeleven.2 en fonction de l'âge, qui doit être très diffuse. Tissu et anticorps. La microcystine lr et l'acide okadaïque provenaient de calbiochem et cα, une sous-unité catalytique purifiée de la pka, est issue de sigma. L'anticorps cnc1 est produit chez le lapin contre un résidu de peptide de recouvrement 818-835 de α11.2 (20). L'anticorps anti-ch1923-1932p, qui se lie spécifiquement à αeleven.2 alors qu'il était phosphorylé à la sérine 1928, s'est levé par opposition à un phosphopeptide tel que les résidus 1923-1932 (25). Les anticorps dirigés contre le récepteur nmda nr1 provenaient de r. Jahn (institut max planck de chimie biophysique, goettingen, allemagne); les anticorps dirigés contre nr2a et nr2b proviennent de r. J. Wenthold (instituts nationaux de la surdité et de différents problèmes de communication, instituts nationaux de la santé, bethesda) (32, 33); les anticorps dirigés contre la pka cα provenaient de c.S. Rubin (université des médicaments albert einstein, bronx, la grosse pomme) (26); et les anticorps dirigés contre les inhibiteurs de la protéine phosphatase-1 1 et une paire de ceux-ci provenaient de a.C. Nairn (yale college, new haven, ct). Anti-psd-95 (34) et anti-sap102 correspondent respectivement à jh62092 et jh62514 dans la réf. 35. Les anticorps opposés à la sous-unité catalytique de la protéine phosphatase pp2a (pp2a / c) et à la protéine map2b apparentée aux microtubules provenaient de transduction laboratories (lexington, ky).

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La quantité de pka cα associée à cav1.2 est quantifiée par immunoprécipitation de cav1.2 et immunoblot avec des anticorps anti-α (26). Les quantités totales d'inhibiteurs de pp2a / c et de pp1 1 et un couple d'entre elles ont été déterminées par immunoblot d'extraits d'hippocampe avec les anticorps correspondants. Tous les immunoblots ont été quantifiés en utilisant la densitométrie (28) avec le logiciel image-quant (molecular dynamics). Ca2 régule l’extension des voies de signalisation (1 à 3). Un influx aigu et incontrôlé de ca2 peut provoquer la mort neuronale par une stimulation excessive du récepteur du glutamate de type n-méthyl-d-aspartate (nmda) (quatre, 5). Une élévation chronique du ca2 a été impliquée dans la perte neuronale liée à l'âge et dans la maladie d'alzheimer (6, 7). La nimodipine (huit), un bloqueur des canaux ca2 de type l unique en son genre, permet d’inverser les connaissances acquises sur l’affaiblissement chez les lapins chez les lapins. Ces observations impliquent que l'élévation du passe-temps de canal de type l provoque un dysfonctionnement neuronal pendant la durée du vieillissement. L'afflux de ca2 via les canaux de type l est régulé positivement> 2 fois dans les neurones de l'hippocampe de rats âgés par rapport à des rats adultes (neuf). L'hippocampe est essentiel pour connaître et mémoriser. Cependant, le fondement moléculaire de la croissance des loisirs de canal de type l au cours du vieillissement n’est pas décrit, à part une augmentation de la protéine cav1. (3, 11). Nous montrons maintenant que la phosphorylation médiée par la protéine kinase à base de camp (pka) du canal de type l cav1.2 augmente de plus de 2 fois au cours du vieillissement et qu'elle peut être considérablement améliorée dans l'intérêt du canal de type l. Une augmentation de l'afflux de ca2 par les canaux de ca2 de type l permettrait de contribuer aux dysfonctionnements neuronaux sous-jacents des signes séniles et de la maladie d'alzheimer. Le fondement moléculaire de la régulation à la hausse structurée par l'âge dans le passe-temps du canal ca2 de type l de type neuronal est essentiellement inconnu. Nous montrons que la phosphorylation du canal de type l cav1.2 à l'aide de la protéine kinase dépendante de l'ampc est prolongée au moyen d'un facteur 2 à l'intérieur de l'hippocampe de rats âgés. L’hippocampe est important pour mieux se connaître et est l’un des premiers domaines de l’esprit affecté par la maladie d’alzheimer. La phosphorylation de cav1.2 à travers la protéine kinase établie par l'ampc améliore fortement son passe-temps. Par conséquent, la phosphorylation de cav1.2 multipliée peut expliquer une partie importante de l’afflux neuronal de ca2 lié à l’âge et de ses effets neuropathologiques. Nous remercions le dr r. Weindruch (université du wisconsin) d’avoir partagé les rats lobund-wistar de sa colonie vieillissante de rats; dr. R. Jahn pour les anticorps anti-nr1; dr. R. J. Wenthold pour les anticorps opposés à nr2a et nr2b; dr. A. C. Nairn pour ses anticorps contre les inhibiteurs de pp1 1 et une paire de; dr. C. S. Rubin pour ses anticorps contre pka cα; et drs. R. Weindruch, p. J. Bertics, p. Lipton et b. S. Ganetzky (université du wisconsin) pour lecture critique du manuscrit. Ces travaux ont été complétés par l'utilisation d'instituts de conditionnement physique répartis dans tout le pays et fournissant le prix r01 ag17502 et le prix des boursiers affiliés à la maladie d'alzheimer quatre-vingt-quatorze-033. Une caractérisation électrophysiologique du canal de type l cav1.2 dans le cœur coronaire a révélé que ces canaux existent dans trois modes différents (77). En mode zéro, cav1.2 n'est pas disponible pour l'activation. La mode se caractérise par l’utilisation de briefings, et le mode est décrit en utilisant des ouvertures de longue durée et des fermetures courtes (77). La transition du mode 0 au mode 1 ou 2 est réglée à l'aide de pka, qui, lorsqu'il est activé, crée une rampe triple dans la plage des canaux de type l disponibles de manière fonctionnelle en l'espace de quelques secondes (17, 78, soixante dix neuf). Le boom dans la gamme de canaux intentionnels de type l chez les rats (neuf) peut être expliqué par la régulation à la hausse de la phosphorylation médiée par la pka, qui acheminerait le canal du mode fonctionnellement silencieux zéro au mode énergétique 1 ou 2. En raison de la phosphorylation de αeleven.2 au moyen de la pka, le passe-temps du canal est multiplié par quatre (23), l'augmentation de la phosphorylation de la sérine 1928 peut expliquer dans une large mesure l'essor du canal de type l lié à l'âge. (Neuf), des mécanismes supplémentaires ne peuvent pas être exclus. En fait, les niveaux d'arnm α11.3 sont améliorés chez des rats fisher 344 âgés de 24 mois au lieu de 13 mois (12, 80). Des peintures plus récentes ont indiqué que le degré de protéine de αeleven.3 est régulé à la hausse dans le voisinage de ca1 sans échange au stade de protéine αeleven.2 (10, 11). Cette régulation à la hausse de l'expression de cav1.3 peut contribuer au passe-temps du canal l-kind. Toutefois, l'essor du passe-temps des canaux de type l et les modifications neuropathologiques qui en résultent pour deux motifs: (i) trois factures pour 20 canaux les plus efficaces de la gamme totale de canaux de type l chez le rat du cerveau antérieur (consistant en l'hippocampe), alors que cav1.2 représente 80. Un boom de 25 dans cav1.3 pourrait donc entraîner une augmentation modeste de l'activité des canaux de type l; mais thibault et landfield (neuf) ont décrit un boom> 2 fois. (Ii) la sensibilité de cav1.Three pour les dihydropyridines, ainsi que de la nimodipine, est 20 fois plus faible que celle de cav1.2 (la ci50 de cav1.3 pour la nimodipine est de -2,7 µm) (quatre-vingt-un, 82). Les doses cliniques de dihydropyridines (concentrations plasmatiques faibles à moyennes-nm) n'affectent probablement pas cav1.3 in vivo mais agissent en particulier par inhibition de cav1.2. On s'attendrait à une bradycardie, à des arythmies et à une altération de l'écoute (voir la discussion dans la réf. Quatre-vingt-deux) si cav1.Three pouvait être considérablement inhibé par la guérison des concentrations sériques de dihydropyridines, en raison du fait que cav1.Three est important pour la section dépolarisation du pacemaker sino-auriculaire cellules du coeur coronaire. (Quatre-vingt-trois) et, lorsqu'ils sont assommés, une bradycardie, une arythmie et une perte auditive causées par le désordre et la dégénérescence des cellules ciliées internes et externes (quatre-vingt-quatre).